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为什么显微镜观察物体需要切成薄片,透光进行观察?用反射光不行吗?

时间:2023-08-08 13:48:05 点击:59次

当然可以啊,体视显微镜就是反射光,只是放大倍率比较低。更高倍率的反射光源的有金相显微镜,是材料,电子和冶金行业用的,用来观察样品的微观表面(生物学能用到的大概只有古生物,他们的标本就是石头,只能先把化石剖面研磨得超光洁,用金相镜观察细节)

那问题就来了,为什么生物样本,想观察更微观的结构就不能用体式显微镜了呢?你可以拿金相显微镜观察一下生物样本,应该就能理解了。能看见东西,但不清楚。有时候一片糊,有时候还会有五颜六色的光晕。

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因为生物样品是透明的。透明的样品,如果光源在下面,显微镜靠收集透射光观察,那信息就比较单纯:被样本吸收掉的光,就是暗信号,透过来的就是明信号,显像就像白底黑字清清楚楚。

但如果光源在上面,显微镜靠收集反射光观察,问题就来了。光源的光线以一定角度照射在样品上,一部分光从上表面就反射回来;一部分光射入样品内部,遇到密度变化的界面再反射回来;一部分光源一直射到样本的下表面,再反射回来;还有一部分直接射穿样品,从下背景板上反射回来。这些信息一股脑被接受成像,小倍率下没问题,因为景深很大;但在大倍率下,就会遇到一个麻烦——中学就学过,光有波动性,会有干涉现象。来自不同深度的反射光,存在相位差;而那种尺寸很小的微观结构,会明显地观察到这种相位差带来的光干涉现象(请回忆一下水面上五颜六色的油膜,中学物理就讲过原理了)。所以生物样品看起来就像万花筒。

所以反射可见光源显微镜看透明样品,没法用高倍镜。高倍只能切成薄片,用透射光观察。

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